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技术资料/正文
HILIC-UHPLC分析N-聚糖键
317 人阅读发布时间：2021-04-27 11:57
HILIC-UHPLC分析N-聚糖键
糖苷键很少对糖蛋白的功能产生影响，因此通常不需要确定。然而，糖蛋白的聚糖结构高度复杂，评估N-糖的糖苷键的构型和位置对分析糖蛋白的结构是有帮助的。已知有五种常见的N-聚糖键，最常见的是N-乙酰氨基葡糖与天冬酰胺（GlcNAcβ1-Asn）连接。与Asn连接的其他类型包括：哺乳动物和古生菌的层粘连蛋白中的葡萄糖，古生菌中的N-乙酰半乳糖胺（GalNAc），鼠李糖素细菌。也有报告显示，葡萄糖在甜玉米中与精氨酸连接。
N-聚糖通过N-糖苷酶F（Peptide N Glycosidase F，PNGase F*）反应从糖蛋白中水解出来。水解的N-聚糖用2-氨基苯甲酰胺（2-AB）标记，然后用多种外切糖苷酶消化。最后，通过亲水相互作用色谱法（HILIC）结合荧光和质谱检测对聚糖进行分析。
N-聚糖键分析一般步骤
1. 样品制备2. N聚糖水解
3. 2-AB标记和标记的聚糖与一系列外切糖苷酶顺序反应
4. 基于UPLC-HILIC-FLD的分析
5. 此外，可以通过MS/MS片段确定详细的聚糖结构
*内切糖苷酶的作用：
内切糖苷酶能从糖蛋白或糖脂中水解寡糖。通常它不会从结合的蛋白质和脂质分子中水解寡糖。内切糖苷酶通过破坏聚合物中两个糖单体之间的糖苷键起作用。
内切糖苷酶H：水解低聚甘露糖和杂合N-聚糖
内切糖苷酶F：水解简单的二价N-聚糖
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北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
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