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技术资料/正文
肽段覆盖率/肽谱图分析
1521 人阅读发布时间：2021-04-27 11:55
肽段覆盖率/肽谱图分析
蛋白样品鉴定过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切，鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息，百泰派克公司会选用在蛋白鉴定过程中常用的6种蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分别对靶蛋白进行酶切和鉴定，在得到更多的碎裂肽段片段的同时，经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。百泰派克公司应用现有的质谱技术平台，提供出以LC-MS/MS为基础的的肽谱图分析，此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达，检测重组蛋白表达过程是否发生断裂。主要用于蛋白质一级结构的确认，通过使用多种蛋白质酶切反应和液质联用技术对肽段的测序，结合专有的分析软件，能对任何非特异性蛋白酶酶解产物的质谱数据进行分析。从而实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。
质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的流程：
• 首先使用6种蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分别对靶蛋白进行酶切和鉴定• 接着使用nano LC-MS/MS或者UV LC-MS/MS 对样品进行分析
• 将得到的肽段覆盖率/肽谱图全序列与您提供的理论序列进行比对
• 得到比对结果
质谱法肽段覆盖率/肽谱图全序列测定的优点：
（1）特异性及非特异性蛋白质酶的组合，可实现对任何蛋白质（多肽）的鉴定达到100%的覆盖率。（2）每个肽段的确认包括：1）基于样品的质量2）基于样品的MS/MS指纹图谱，所以比仅使用一级质谱进行测定更准确。
样品要求：
胶内样品和溶液样品均可以用来进行上述测序样品纯度越高越好，建议超过80%的蛋白质
需要的靶蛋白样品量：10-20ug
蛋白质胶样品也可用于肽段覆盖率测定，但需对样品进行特殊的前处理。
案例分析：
蛋白样品100%序列验证服务在实际的实验过程中，按照尽量提高效率和降低花费的原则，我们会首先对客户提供的理论序列进行分析，分析过程是按照几种不同的蛋白酶酶切位点进行肽段覆盖率的预测，假如可以仅仅通过3种蛋白酶酶切就可以100%的覆盖全序列，实际实验过程就会先用这3种蛋白酶进行酶切和后续的序列分析实验，这样可以有效的降低实验的成本。以下是之前项目的部分数据，该项目中客户按照理论序列表达抗体药物，一级序列需要进行验证，以证明表达得到的抗体与理论序列一致，部分实验数据展示如下：
结题报告中，我们会按照下图所示的方式给出肽段覆盖率的详细数据。
中/英文项目报告
在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）
2. 相关的质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 生物药物肽段覆盖率信息
生物药物肽段覆盖率测定一站式服务
您只需下单-寄送样品百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
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地址：北京市经济技术开发区科创六街88号院
关于百泰派克
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。
百泰派克技术平台
检测分析平台：多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱，NMR。蛋白质组分析平台：Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM；蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
代谢组分析平台：靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析；通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。
蛋白质从头测序平台：Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析；100%序列测定，精准蛋白、抗体测序。
生物制药分析平台：生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。
流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。