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技术资料/正文
GST pull-down蛋白相互作用分析
263 人阅读发布时间：2021-04-27 11:36
GST pull-down蛋白相互作用分析
标准的pull-down分析需要带有重组亲和标签的纯化蛋白，该标签具有“诱饵”的功能，并固定在标签特异性亲和配体上。然后将另一种蛋白质或“猎物”蛋白质与“诱饵”蛋白质一起孵育。当这两种蛋白质发生物理相互作用时，“猎物”蛋白质将被“诱饵”蛋白质捕获。之后，取决于亲和配体，可以使用洗脱缓冲液洗脱相互作用的“猎物”蛋白。最后，“猎物”和“诱饵”蛋白都可以通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分离，然后对凝胶染色通过蛋白质印迹法进行检测。GST pull-down融合蛋白沉降技术，利用基因重组将带有GST标签的载体插入到目标蛋白A上，谷胱甘肽包裹的磁珠与目标融合蛋白结合，加入细胞裂解液后，具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附，加入过量的谷胱甘肽进行洗脱，洗脱后的样品通过质谱分析法对样品进行分析鉴定。GST pull-down融合蛋白沉降技术蛋白相互作用分析主要是研究体外强烈或者稳定的蛋白质间相互作用；可以鉴定两种已知的感兴趣蛋白质可能存在的直接相互作用；寻找可能与目标蛋白存在相互作用关系的未知蛋白。
除了确认蛋白质之间的相互作用外，GST pull-down融合蛋白沉降技术蛋白互作分析法还可用于表征蛋白相互作用的条件。例如，使用蛋白质结构域截短法进行pull-down法可以对蛋白质相互作用至关重要的功能区域进行确定。此外，GST pull-down融合蛋白沉降技术蛋白相互作用分析法还可用于探索目的蛋白质相互作用的伴侣，将“诱饵”蛋白与混合蛋白溶液或细胞/组织提取物一起孵育。洗涤步骤后，可以通过高通量方法洗脱并对结合的蛋白质进行质谱鉴定。
*百泰派克提供基于质谱的pull-down样品蛋白质谱鉴定，详情参见：基于质谱的互作蛋白质谱分析方法
Pull-down互作蛋白质分析流程
作为领先的组学技术服务公司，百泰派克生物科技在基于质谱的蛋白互作分析方面拥有多年经验。百泰派克提供蛋白表达和纯化的高效策略，以及用于pull-down蛋白互作分析的最优化方案。我们以严格的质量控制和较短的检测周期为特色，百泰派克生物科技为节省您的宝贵时间和预算，向客户提供可定制的一站式服务，涵盖您项目中从基因合成到数据报告的每个步骤：
• 基因合成，表达质粒构建-诱饵蛋白的表达，纯化和固定化-猎物蛋白的表达和纯化-孵育，洗涤和洗脱
• 通过SDS-PAGE, Western对蛋白相互作用进行鉴定
• LC-MS质谱鉴定相互作用蛋白-数据分析-出具中英文报告-免费咨询
How to order?
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关于百泰派克
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。
百泰派克技术平台
检测分析平台：多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱，NMR。蛋白质组分析平台：Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM；蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
代谢组分析平台：靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析；通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。
蛋白质从头测序平台：Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析；100%序列测定，精准蛋白、抗体测序。
生物制药分析平台：生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。
流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。