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技术资料/正文
蛋白质免疫印迹和电转移服务
169 人阅读发布时间：2021-04-27 11:29
白质免疫印迹和电转移服务
电泳分离的蛋白质从凝胶基质转移或“印迹”到膜（通常是硝酸纤维素或PVDF）上，然后在膜表面进行基于抗体的后续检测，称为蛋白质免疫印迹（Western Blot或immunoblotting）。百泰派克生物科技提供蛋白质免疫印迹分析服务，蛋白质免疫印迹法通过高选择性和高敏感的抗体-抗原相互作用，可用于从复杂蛋白质混合物中检测特定的目标蛋白质，例如组织匀浆或细胞提取物等。所得数据可用于对目标蛋白质进行定性和半定量分析。
电转移一般流程图
蛋白免疫印迹是一种广泛使用的蛋白质分析技术，可用于检测组织匀浆或提取物样品中的特定蛋白质。蛋白免疫印迹法使用凝胶电泳法分别通过3-D结构和多肽链的长度对天然蛋白质及变性蛋白质进行分离，分离后的蛋白质被转移到膜（通常是硝酸纤维素膜或PVDF）上，最后在膜上用对目标蛋白质具有特异性的抗体进行进行特异性识别。Western Blot广泛应用于分子生物学、生物化学、免疫遗传学和其他分子生物学领域。
在蛋白免疫印迹分析中，首先利用各种方法，如SDS-PAGE和IEF，通过等电点（pI）、分子量、电荷或这些因素的组合，从凝胶电泳中分离出样品中的蛋白质。常用SDS-PAGE进行分离，因为所有蛋白质都被溶解在凝胶内，沿相同方向迁移，结合SDS的变性作用，抗原表位更容易被识别。
凝胶电泳分析之后，将蛋白质从凝胶转移至由硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯（PVDF）制成的膜上，以用于抗体检测。PVDF膜与蛋白质的结合能力比硝酸纤维素膜更高，但硝酸纤维素膜与较小蛋白质结合的更好。转移蛋白质的主要方法是电印迹，电印迹法使用电流将蛋白质从凝胶中拉入PVDF或硝酸纤维素膜中。电泳转移方法包括：湿法转印、半干转印和半湿转印。如果使用等电点聚焦进行蛋白质分离，那么利用压力转印扩散来转移蛋白质更为有效。
转印过程从一个小时（半干转印）到过夜转印（湿法转印），时间不等。转印完成后，膜的自由结合位点被蛋白质混合物封闭，因此后续抗体检测不会受到干扰。即可对转印到膜上的蛋白质进行抗体检测。包含蛋白质的膜首先与一抗进行孵育，然后再由识别一抗的二抗结合后进行检测。二抗一般带有报告基团，并具有很高的灵敏度。
最灵敏的检测方法是使用增强化学发光（ECL）：通过抗体-辣根结合物对一抗进行识别。使用增强化学发光的特殊变体，可检测低至1 pg的蛋白条带。
蛋白免疫印迹还可用于追踪蛋白质的磷酸化，与磷酸化蛋白质的所有亚型相结合的抗体会在二维凝胶上呈现“念珠状”外观。也可用于鉴定免疫共沉淀产生的复合物中的已知蛋白和未知蛋白，只要目标蛋白质在凝胶中，就可以通过考马斯蓝染色，从凝胶中切出相应的斑点，进行后续质谱鉴定。
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关于百泰派克
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。
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流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。