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技术资料/正文
生物制药N端测序
227 人阅读发布时间：2021-04-27 11:26
生物制药N端测序
Edman降解（埃德曼降解）法，是由菲尔•埃德曼（Pehr Edman）首先创立用于肽链或蛋白质中N-端氨基酸序列分析的方法。Edman降解法检测的原理非常简单，在碱性条件下反应，用异硫氰酸苯酯（Phenylisothiocyanate, PITC）与待检测的蛋白质（多肽）的N-端氨基生成苯氨基硫甲酰（PTC）的衍生物，然后处理-关环-选择性切断肽链N-端，得到N-端氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。接着用有机溶剂萃取衍生物，在酸的作用下，不稳定的衍生物转变为稳定的的乙内苯酰硫脲（PTH）衍生物，余下肽链中的酰胺键不受影响。通过用HPLC或电泳法分析生成的乙内酰苯硫脲氨基酸（PTH-氨基酸），可以鉴定出氨基酸类别。重复氨基酸鉴定反应可以达到对N端氨基酸按照从N端到C端的方向依次对氨基酸序列进行分析。对于序列较长的蛋白质（多肽），还可以将样品先切成小的肽段，先对肽段序列分析，再将肽段信息进行拼接即可获得完整蛋白质的序列信息。
蛋白质N端测序流程
Edman降解法用于N端测序的优点：
1. PITC与所有氨基酸残基的反应产率和回收率高，因此副产物少，可通过色谱进行准确鉴定；2. 反应时间快，对于大多数氨基酸残基来说，30min耦合时间，5min切割反应时间即可；
3. 反应后的肽链仍然是完整的，可用Edman降解法重复测定新生的N末端氨基酸。
Edman降解法用于N端测序需要注意的问题：
1. 样品纯度需 >90%, 盐离子含量在50mmol/L之内，不含SDS等变性剂，N端必须是均一的高纯样品；2. 10Pmol 样品可以测定20 aa；
3. 液体样品不能含有蛋白酶，建议尽早测试，防止时间太长容易降解；
4. 转膜样品在转膜前不宜放置太久以防样品扩散，转膜后可密封保存3-6个月, 建议使用Coomassie R-250进行染色，电泳缓存液建议使用CAPS buffer；
5. 样品无信号峰是，建议蛋白进行N-端封闭；
6. 建议整个反应过程中尽可能使用高纯buffer。
案例分析：
百泰派克生物科技采用岛津公司推出的PPSQ系列仪器实现对蛋白或者多肽样品N端氨基酸序列的分析，可以分析N端30个以上的氨基酸。以下是我们对某一蛋白药物进行分析的实际色谱结果，该项目对样品中蛋白药物的前15个氨基酸进行了分析。从下图（第15个氨基酸的色谱图）可以看出，色谱峰值仍然非常高，可以得到非常准确的结果。
中/英文项目报告
在技术报告中，百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告，报告包括：1. 实验步骤（中英文）
2. 相关的质谱参数（中英文）
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 生物药物N端序列信息
生物药物N端序列测定一站式服务
您只需下单-寄送样品百泰派克一站式服务完成：样品处理-上机分析-数据分析-项目报告
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关于百泰派克
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。
百泰派克技术平台
检测分析平台：多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱，NMR。蛋白质组分析平台：Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM；蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
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流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。
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