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1D SDS-PAGE和IEF服务

66 人阅读发布时间:2021-04-27 11:21

1D SDS-PAGE和IEF服务

百泰派克生物科技提供一站式蛋白质凝胶服务相关解决方案,包括SDS-PAGEIEFNative PAGE分析。

1D SDS-PAGE服务

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)是分离大分子最常用的技术之一,包括DNARNA和蛋白质。电泳过程是通过施加电场作用使带电离子进行迁移的过程。在该技术中,带电分子的迁移率与其净电荷和通过的溶液的电阻成正比。十二烷基硫酸钠(SDS)是一种阴离子去污剂,溶解过程中,其分子在较广pH范围内具有净负电荷。多肽链与其相对分子质量成比例地结合一定数量的SDSSDS上的负电荷破坏蛋白质的大多数复杂结构。      1D SDS-PAGE
将蛋白质混合物添加到凝胶上样空中后,可能会出现最大的蛋白质还没有迁移到凝胶上时,最小的蛋白质在已经跑出了凝胶的现象。因此为了获得更好的分离效果,利用凝胶的特性,将凝胶分为浓缩胶和分离胶两层的方法能够解决该问题。PAGE胶底部是较大的分离胶,顶部是较窄的浓缩胶。电泳缓冲液由甘氨酸制成,pH 8.3,浓缩胶的pH值为6.8,而分离凝胶的pH值为8.8。电泳期间,电流由带负电荷的分子携带向同一个方向迁移。由于在pH 8.3时仅有约10%的甘氨酸分子带负电荷,因此此处的电流主要由堆积缓冲液中的Cl-携带,Cl-离子赶在蛋白质之前朝堆积凝胶底部堆积。从而使得由SDS包裹的蛋白质分子被夹在位于上方的甘氨酸分子和下方的Cl-之间,并被浓缩成比最初加载的体积小得多的条带。

随着电流作用绩效迁移,蛋白质迁移到分离胶中。此时,pH8.8的分离凝胶缓冲液中的甘氨酸成为带负电荷的分子,能够非常快速的迁移,几乎与Cl-离子保持一致,而蛋白质紧随其后。此时蛋白质经由Cl-和甘氨酸阴离子的移动轨迹进入分离凝胶而携带电流。蛋白质变成一种具有类似流体动力学性质的杆状带负电荷高分子,其迁移率仅取决于其分子质量。

SDS-PAGE广泛应用于蛋白质组学分析,包括蛋白质分子量测定蛋白质鉴定,样品纯度分析,二硫键鉴定蛋白质定量等。

等电聚焦IEF分析服务

等电聚焦(IEF)是一种基于蛋白质等电点(pI)分离蛋白质的一种电泳技术。当pI=PH时,蛋白质净电荷为0,因此蛋白质不会在电场中迁移。在IEF中,蛋白质的分离是在含有两性电解质混合物的聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶中进行的,两性电解质在电场中迁移并在凝胶中形成pH梯度。蛋白分子被集中在一个具有pH梯度的介质中,通过介质的电流将产生带正电荷的氧化极和带负电荷的还原极。带电的蛋白质分子会向与其有相反电荷的一极运动,直到与周围pH值与其等电点相同时带电分子才停止在凝胶中运动,即蛋白质净电荷为0时。

于是,具有相同等电点的蛋白质集中在pH固定的条带中。每种蛋白质都位于pH梯度中与其pI相对应的位置。IEF技术具有极高的分辨率,即使仅有一个电荷不同的蛋白质,也会被分到不同的条带。


等电聚焦IEF分析
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关于百泰派克

北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP)成立于2015年,是国家级高新技术企业,业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块,从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务,为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组(iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH)、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰(二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等)、靶向和非靶向代谢物检测。

百泰派克生物科技检测平台包括:检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室,以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业,以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系,协助客户发表了多篇中英文文章,包括Cell等多家高水平期刊。

公司自主检测平台发展至今,已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台,积累了丰富的实践经验,凭借专业的技术和优质的服务水平,客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校,也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质(组)研究技术包裹,助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破,为生命科学的发展做出贡献。
 

百泰派克技术平台

检测分析平台:多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱,NMR。
蛋白质组分析平台:Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM;蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
代谢组分析平台:靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析;通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台:CBA、FlowCytomix;微量样品需求,分析多种细胞因子。
蛋白质从头测序平台:Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析;100%序列测定,精准蛋白、抗体测序。
生物制药分析平台:生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。
流式细胞多因子检测平台:CBA、FlowCytomix;微量样品需求,分析多种细胞因子。


 
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