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技术资料/正文
蛋白测序
372 人阅读发布时间：2021-04-27 11:00
蛋白测序
蛋白质一级结构是组成蛋白质多肽链的线性氨基酸序列。蛋白测序，蛋白序列分析，蛋白一级结构分析，蛋白氨基酸序列分析是确定蛋白质全部氨基酸序列的过程。通过蛋白质测序获得的信息，有非常多有价值的用途，包括：1，用于蛋白质的鉴定；2，设计分子克隆的探针；3，合成可用作免疫原的肽段等。蛋白测序服务常见有两种主要的方法：Edman降解（Harvey和Ferrier，2011； Bauer等，1997）和质谱分析（MS）（Sahukar等，2016）。目前使用最广的蛋白质测序和鉴定方法是质谱法，而Edman降解则是表征蛋白质N端最重要的方法之一。百泰派克生物科技使用nano LC-MS/MS纳升色谱结合串联质谱及岛津公司Edman降解测序系统对蛋白质序列进行分析，提供基于质谱的蛋白测序分析服务，包括对蛋白质的氨基酸组成分析，N端测序，C端测序和全序列分析，以及基于Edman降解的蛋白质N端序列分析服务。对于未知理论序列的蛋白质，提供基于从头测序法的蛋白质从头测序服务，对蛋白序列进行分析。
相关服务：
蛋白质N/C端测序
基于Edman降解的蛋白质N端测序
蛋白质全长序列分析
蛋白从头测序
基于质谱的蛋白质序列分析
质谱法用于蛋白质序列分析，较Edman降解法而言，其优点在于，质谱法更敏感，可以更快地裂解肽，可以识别末端封闭或修饰的蛋白质。百泰派克生物科技利用现有的高分辨率质谱技术平台，提供以质谱为基础的蛋白质序列分析服务，可实现对所测定靶蛋白序列100%的覆盖。此分析可以用于确认重组蛋白是否得到完整表达，检测重组蛋白表达过程是否发生断裂等。蛋白样品序列分析过程一般只会使用Trypsin对蛋白进行酶切，鉴定到的肽段覆盖率大概在60%。为了得到靶蛋白的全部序列信息，百泰派克生物科技会选用在蛋白序列分析过程中常用的6种蛋白酶（Trypsin、Chymotrypsin、Asp-N、Glu-C、Lys-C和Lys-N）分别对靶蛋白进行酶切和质谱测定，在得到碎裂肽段片段的同时，经过肽段之间的拼接完成蛋白序列100%的测定。百泰派克使用Thermo公司最新推出的Obitrap Fusion Lumos质谱仪实现对蛋白样品的序列分析，Obitrap Fusion Lumos质谱仪是现在分辨率和灵敏度最高的质谱仪，保证了低丰度肽段碎裂片段鉴定的灵敏度；同时在肽段碎裂过程中采取HCD与ETD结合的模式，保证肽段碎裂片段的完整性。可以实现蛋白样品的N端，C端序列分析以及蛋白全长序列分析。
蛋白质测序示意图
Edman降解法蛋白质N端序列分析
Edman降解测序法是能够获得蛋白质N端氨基酸序列信息的化学方法，由Pehr Edman在1950年代初期开发的。该方法可在不干扰肽键的情况下标记并对N末端的氨基酸序列进行分析（Hunkapiller，1988； Liu等人，2016）。Edman降解法在蛋白质样品N端序列分析中得到了广泛应用。但是在实际应用中，Edman降解法也有一定的局限。例如N末端封闭或有化学修饰的情况下将不能使用Edman降解法对蛋白质序列进行分析。这时就可以借助先进的nano LC-MS/MS纳升色谱结合串联质谱平台对N端序列进行质谱测序，质谱平台可以实现末端封闭和修饰的蛋白质的序列分析，与Edman降解法形成互补，保证N端测序服务的顺利进行。百泰派克生物科技采用岛津公司 edman测序系统，为广大科研工作者和科研客户提供纯化后蛋白产物、蛋白疫苗以及各类蛋白样品的N端测序服务。采用我们的测序系统，可以测定N端多达30个氨基酸的序列信息。
样品制备
有许多可以进行样品制备的方法，没有特定的方法是效果最好的样品制备方式。每个样品方式都有各自的优点和缺点。制备特定样品的最佳方法可结合实验室的经验及常用方法，并参考您自己关于产率，纯度，成本和速度的要求。最常用于制备蛋白质测序样品的方法包括：1. 十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
2. 高效液相色谱（HPLC）
3. 毛细管电泳（CE）
*选择样品制备方法时需要考虑的因素包括：1）实验周期要求，2）样品的纯度要求，3）所需蛋白的质量。如果您暂时不具备样品制备的条件，百泰派克生物科技一站式蛋白分析服务提供样品制备服务，欢迎来电咨询。
关于样品
百泰派克生物科技一站式蛋白测序服务可对来自PVDF膜，胶点，胶条，溶液等状态下的样品进行蛋白质序列分析。样品运输是大家比较常见的问题，切下的蛋白条带进行密闭包装，使用冰袋运输即可；溶液样品，可进行真空抽干或冷冻抽干后，使用冰袋运输，也可通过干冰对样品进行运输。欢迎来电咨询。How to order?
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地址：北京市经济技术开发区科创六街88号院
关于百泰派克
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。
百泰派克技术平台
检测分析平台：多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱，NMR。蛋白质组分析平台：Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM；蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
代谢组分析平台：靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析；通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。
蛋白质从头测序平台：Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析；100%序列测定，精准蛋白、抗体测序。
生物制药分析平台：生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。
流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。