- 移动端
北京百泰派克生物科技有限公司品牌商
9 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0
- 0
- 2
- 2
推荐产品
技术资料/正文
基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC
347 人阅读发布时间：2021-04-29 15:05
基于标签的蛋白质定量技术-iTRAQ，TMT，SILAC
细胞中蛋白质组丰度的动态变化对各种生命过程都有重要影响。例如，许多疾病的发生和发展通常伴随着某些蛋白质的异常表达。定量蛋白质组学是对一个基因组中表达的所有蛋白质或一个复杂混合系统中的所有蛋白质进行准确的定量和鉴定。目前，定量蛋白质组学技术主要分为标记策略和非标记策略，其中标记策略分为体内标记（如SILAC）和体外标记（如iTRAQ，TMT）。相对定量和绝对定量等压标签（iTRAQ）
iTRAQ是AB SCIEX公司于2004年开发的一种定量蛋白质组学研究技术。该技术可以比较许多不同样品中的蛋白质。例如，它可以研究不同病理条件或不同发育阶段的组织样品中蛋白质表达水平的差异。同时，iTRAQ可以准确地定量和鉴定一个基因组中表达的所有蛋白质或一个复杂混合系统中的所有蛋白质。iTRAQ可以使用8种不同的同位素试剂同时标记和比较8种不同的蛋白质样品。标记试剂由报告基团，平衡基团和胺特异性反应基团组成。iTRAQ的工作流程
iTRAQ技术的一般过程如下图所示。简要地说，样品被胰蛋白酶裂解后，被烷基化并酶消化成肽段。用iTRAQ试剂的标记标签对产生的肽段进行差异标记，然后将标记的样品混合在一起进行LC-MS/MS分析。
四种不同样品（S1-S4）多重反应的一般方案，用四种不同的颜色表示（Zieske et al.,2006）iTRAQ的优势
1. 在一次实验中，iTRAQ可以同时标记4至8个样品。操作简单快捷。适用于多个样品的高通量检测，并且实验设计更加灵活；
2. iTRAQ是在肽段水平上进行的体外标记，适用于许多类型的生物样品；
3. iTRAQ具有重复性好、灵敏度高的特点，可以同时进行定性和定量。
串联质量标签（TMT）
TMT是美国Thermo Fisher Scientific开发的一种肽体外标记技术。该技术最多可以使用10个同位素标签来标记多肽的氨基。经过LC-MS/MS分析后，可以同时比较10个不同样品中蛋白质的相对含量。TMT广泛用于疾病标志物筛选、药物作用靶标、动植物抗病或抗逆机制、动植物发育和分化机制等领域。TMT的工作流程
TMT的一般过程如下图所示。将不同的蛋白质样品变性、还原、烷基化并消化成肽段样品。然后将这些肽段样品用TMT试剂盒标记后合并为一个样品。使用HPRP液相色谱分离合并的样品，并将馏分串联为12个样品。纯化后，通过HPLC-MS分析每个样品。分析数据以获得蛋白质的定性和相对定量信息。
使用10plex TMT进行相对定量的流程（Zhang et al.,2017）TMT的优势
1. 高灵敏度：可以检测低丰度的蛋白质；
2. 分离能力强：可以分离酸/碱蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白、不溶性蛋白等；
3. 应用范围广：可以鉴定任何类型的蛋白质，包括膜蛋白质、核蛋白质和胞外蛋白质；
4. 高通量：可以同时分析10个样品，特别适合对采用多种处理方法或多种处理时间的样品进行差异蛋白质分析。
细胞培养中氨基酸的稳定同位素标记（SILAC）
SILAC是用于高通量定量蛋白质组学的有效方案，它是根据依赖于必需氨基酸的哺乳动物细胞增殖的原理设计的。SILAC用于定量蛋白质组学研究，可以分析细胞中的蛋白质相互作用和蛋白质表达差异，为复杂的哺乳动物细胞蛋白质组学的全面系统的定性和定量分析提供有效的解决方案。SILAC的工作流程
SILAC的一般过程如下图所示。向细胞培养基中添加轻、中或重稳定同位素标记的必需氨基酸（主要是赖氨酸和精氨酸），通过细胞的正常代谢，所有新合成的蛋白质都被标有稳定同位素。等量混合所有类型的蛋白质，通过SDS-PAGE分离、切胶和酶消化后，用LC-MS/MS分析可以获得相关蛋白质的定量和定性结果。
使用SILAC进行蛋白质定量（Esthelle et al.,2019）SILAC的优势
1. SILAC是一种活细胞水平的标记技术。标记效果稳定有效，标记效率不受裂解液的影响。
2. SILAC需要的样品更少，通常每个样品仅几十微克的蛋白质就足够了。
3. SILAC使用质谱法同时鉴定和定量多种蛋白质。
4. SILAC使用体内标记技术，接近样品的真实状态。
参考文献
1. Zieske Lynn R. A perspective on the use of iTRAQ™ reagent technology for protein complex and profiling studies. Journal of Experimental Botany, 2006(7):7.
2. Lichao Zhang, Joshua E. Elias. Relative Protein Quantification Using Tandem Mass Tag Mass Spectrometry. Methods in Molecular Biology, 2017, 1550:185.
3. Esthelle Hoedt, Guoan Zhang, Thomas A. Neubert. Stable Isotope Labeling by Amino Acids in Cell Culture (SILAC) for Quantitative Proteomics. Adv Exp Med Biol. 2014;806:93-106.
相关服务
TMT/iTRAQ/MultiNotch定量蛋白组学分析基于TMT的蛋白质组学分析
基于SILAC/Dimethyl标记的定量蛋白组分析
How to order?
联系我们：
手机：18244218588
QQ：2940408445
网址：
http://www.biotech-pack.com/label-based-protein-quantification-technology.html?utm_source=online_shop&utm_medium=tech_source_pdf&campaign=tech_source_pdf
邮箱：market@biotech-pack.com
地址：北京市经济技术开发区科创六街88号院
关于百泰派克
北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）成立于2015年，是国家级高新技术企业，业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块，从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务，为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组（iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH）、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰（二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等）、靶向和非靶向代谢物检测。百泰派克生物科技检测平台包括：检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室，以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业，以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系，协助客户发表了多篇中英文文章，包括Cell等多家高水平期刊。
公司自主检测平台发展至今，已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台，积累了丰富的实践经验，凭借专业的技术和优质的服务水平，客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校，也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质（组）研究技术包裹，助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破，为生命科学的发展做出贡献。
百泰派克技术平台
检测分析平台：多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱，NMR。蛋白质组分析平台：Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM；蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
代谢组分析平台：靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析；通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。
蛋白质从头测序平台：Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析；100%序列测定，精准蛋白、抗体测序。
生物制药分析平台：生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。
流式细胞多因子检测平台：CBA、FlowCytomix；微量样品需求，分析多种细胞因子。