灭活疫苗病毒结构蛋白纯度分析

灭活疫苗是指将病原微生物培养后灭活而制成的疫苗，是一种较为常见的疫苗类型。通过对细菌、病毒或立克次tǐ的培养物灭活，使其丧失对靶器官的致病力，但同时保存抗原的免疫原性，能够刺激免疫系统产生免疫反应，从而达到预防治疗疾病的目的。对于病毒灭活疫苗而言，病毒的结构蛋白是疫苗zuì重要的组成成分之一，它包括表面蛋白和核壳蛋白。病毒的结构蛋白是病毒生命周期和病毒感染宿主的关键因素，也是疫苗引发免疫反应的主要靶点。灭活疫苗病毒结构蛋白纯度是蛋白质结晶以及严谨的结构和功能研究的关键。不纯净的样品会导致整个实验的结果不准确。另外，蛋白质纯度是蛋白质研究和生物制药应用非常重要的特征。

利用毛细管电泳法（CE-SDS）或SDS-PAGE电泳法的灭活疫苗病毒结构蛋白纯度分析法简单、成本很低，且在确定样品中蛋白质组分方面灵敏度很高，因而成为蛋白纯度分析常用的技术之一。SDS-PAGE可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离。

分子筛HPLC，又称为tǐ积排阻色谱(size exclusion chromatograghy，SEC)，其工作原理是基于小分子量的化合物进入凝胶孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，会更早的被洗脱下来。分子筛色谱的优势在于能够处理至少1nmol的目的蛋白，并得到很好的分离效果，分离时间也很短，一般在3个小时以内，同时获得的层析分离峰也更小。SEC进行蛋白纯化的优点：（1）可进行缓冲液交换和脱盐；（2）可分离其他纯化技术难以分离的类似物（如蛋白片段和低聚物）；（3）可与多种溶剂相容；（4）不依赖于蛋白质的任何一种特殊形式进行保留和洗脱。

生物制品表征纯度分析示意图

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百泰派克生物科技传统疫苗表征内容

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