蛋白质等电点分析之方法学验证

蛋白质的等电点与其氨基suān序列和三维结构密切相关。每种特定蛋白质都有其固定的等电点。因此，通过比较不同蛋白质的等电点，我们可以研究它们之间的结构和功能差异。精确测定蛋白质的等电点在对生物制品电荷异质性的表征中扮演着重要的角色。

毛细管等电聚焦（capillary isoelectric focusing, cIEF）是生物制品等电点分析中zuì常用的方法。该微分离技术利用毛细管两端施加直流电压，使得载tǐ两性电解质在毛细管内形成一定范围的pH梯度。根据其所带电荷，蛋白质会在梯度中向阳jí或阴jí移动，直到净电荷为零的特定pH值（即等电点pI）停止。这样，蛋白质可以聚焦在jí窄的区段上，从而实现高效分离，并获取有关蛋白质等电点的信息。

基于cIEF的蛋白等电点检测具有诸多优势，包括短时间分析、高分辨率、良好的重复性、高精确度和样本用量少等。因此，它已成为多种生物制品研发与质量控制中至关重要的技术，包括氨基suān、多肽、重组蛋白、抗tǐ和疫苗等生物制品的表征分析。该方法不仅能够快速准确地确定蛋白质的等电点，还为生物制品的质量控制提供了关键的信息和依据。

北京百泰派克生物科技有限公司BTP参照《中华人民共和国药典》2020年版三部通则0542/四部通则0542毛细管电泳法，对基于cIEF的蛋白等电点检测能力进行了验证，公司通过CNAS实验室认可。BTP能够提供基于cIEF的蛋白等电点检测服务，并提供包括方法学建立、验证以及后续样品检测的全面解决方案。

• 方法参考：

《中华人民共和国药典》2020年版三部通则0542/四部通则0542毛细管电泳法

• 设备配置：

BECKMAN COULTER PA800+毛细管电泳仪

• 试剂配置：

磷suān、冰醋suān、氢氧化nà、精氨suān、尿素、亚氨基二乙suān、Pharmalyte 3-10 for IEF、CIEF Gel等。

• 验证参数（示例）：

1 专属性

取相同量的空白对照品与标准品，用测定结果进行评价。

结果判断标准：标准品应分离度良好，有固定保留时间，基质干扰小。

1.1 空白对照品与标准品溶液的制备；

1.2 上机检测；

1.3 专属性试验结果展示：

空白对照品与标准品的等电点分析谱图

1.4结论：

空白对照品在标准品出峰位置处无干扰峰，可特异性将标准品和空白对照分离，符合判断标准，说明此方法具有专属性。

2 重复性

取相同量的标准品，用6个测定结果进行评价。

结果判断标准：6个测定结果中的标准品出峰时间和PI值的RSD≤5%。

2.1 标准品溶液的制备；

2.2 上机检测；

2.3 重复性试验结果展示：

标准品的等电点分析示例表格

2.4结论：

由标准品的等电点分析表格可以看出，各出峰时间和PI值的RSD值均在标准范围内，说明此方法的重复性良好。

3 仪器稳定性

取相同量的标准品，用6个测定结果进行评价。

结果判断标准：6个测定结果中的标准品出峰时间和PI值的RSD≤5%。

3.1 标准品溶液的制备；

3.2 上机检测；

3.3 仪器稳定性试验结果：

标准品的等电点分析示例表格

3.4结论：

由标准品的等电点分析表格可以看出，各出峰时间和PI值的RSD值均在标准范围内，说明仪器稳定性良好。

综合上述实验结果，BTP基于毛细管等电聚焦（cIEF）技术的蛋白等电点检测方法符合药典要求，通过能力验证。

百泰派克生物科技-生物药物表征，生物质谱多组学优质服务商

北京百泰派克生物科技有限公司（Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP）从事以生物质谱为依托的生物药物表征，大分子物质（包括蛋白质、多肽、代谢物）质谱分析以及小分子物质检测服务。
1、公司采用ISO9001质量控制体系，专业提供以质谱为基础的CRO检测分析服务；
2、获国家CNAS实验室认可，为客户提供符合全球药政法规的药物质量研究服务；
3、业务范围覆盖蛋白质组学、多肽组学、代谢组学、生物药物表征、单细胞分析、单细胞质谱流式、生信云分析以及多组学生物质谱整合分析等；
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