bca法测蛋白含量

BCA（Bicinchoninic Acid，2,2-联喹啉-4,4-二甲酸二钠）钠盐是一种具有吸湿性，易溶于水或乙醇的淡黄色粉末。BCA是稳定的水溶性复合物，可与Cu+高度特异性结合产生紫色复合物。该复合物在562nm处有最大吸光值，并与蛋白浓度成正比。

蛋白含量指的是样品中蛋白质的总质量或数量，可以通过BCA法来测定。其原理是在碱性条件下，蛋白质可以将Cu2+还原为Cu+，Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物（两分子BCA螯合一个Cu+），这种紫色络合物的光吸收强度与蛋白质浓度成正比，因此可以通过测定其在特定波长下的吸光度来计算蛋白质的含量。

图1 BCA法测定蛋白质含量原理

所需试剂：BCA试剂（常温保存），Cu试剂（常温保存），PBS（磷酸缓冲液）（常温保存），BSA（牛血清白蛋白）标准品-5mg/mL（-20℃保存）•

检测方法：微孔酶标仪法•

实验步骤：•

1、工作液配制:根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀（混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失）。BCA工作液室温24小时内稳定（建议现配现用）。

2、标准品稀释:取10μLBSA标准品用PBS稀释至100μL，使终浓度为0.5mg/mL。将标准品按0，2，4，6，8，12，16，20μL加到96孔板的蛋白标准品孔中，各孔加PBS补足至20μL。

3、样品稀释：将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20μL到96孔板的样品孔中。（由于移液器在取小量样品时误差偏大，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后）

4、含量测定：各孔加入200μL BCA工作液，盖上96孔板板盖，于37°C放置15-30min。用酶标仪测定A562nm。将各稀释浓度标准品的A562nm处数据导入Excel，做散点图，得出标准曲线公式，根据标准曲线公式计算出未知蛋白的浓度。（使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果）

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