乙酰化的检测方法

蛋白质乙酰化是一种重要的蛋白质翻译后修饰，是乙酰基供体（如乙酰辅酶A）通过酶学或非酶学的方式将乙酰基团共价结合到赖氨酸残基上的过程。目前，已知有两类乙酰化形式——Nα乙酰化和Nε乙酰化。Nα乙酰化是指蛋白质的N末端被乙酰化修饰，一般认为不可逆，在真核生物中非常普遍，存在于将近85%的真核蛋白中，在原核生物中非常少见。与Nα乙酰化相反，Nε乙酰化是动态的、可逆的，主要在组蛋白、高迁移率基团( HMG)蛋白、转录因子、核受体和α-tublin上发生。

图1 两种类型蛋白质乙酰化的过程

关于蛋白质的乙酰化研究历史已长达60多年，目前已成为国际上蛋白质领域的研究热点。

早期技术：

早期的乙酰化蛋白检测方法主要有免疫亲和检测和放射性检测，它们都是利用特异性抗体来识别乙酰化蛋白，其中放射性检测更适用于体内标记过或者体外酶催化合成的乙酰化蛋白。但这些方法都不能得到乙酰化修饰位点的具体信息。

现在常用技术：

二维电泳与免疫印记结合：利用二维电泳分离目标蛋白，然后用能特异性识别乙酰化蛋白的抗体进行探针处理。这些抗体将与乙酰化蛋白结合，形成抗原-抗体复合物。接下来通过加入标记的二抗（如辣根过氧化物酶或荧光染料标记的抗体）来检测这些复合物，从而可视化乙酰化蛋白的存在和分布。•

特点：特异性灵敏度高；但技术性强，操作方法复杂

生物质谱技术：首先在细胞培养时用不同分子量的同位素标记细胞蛋白质（SILAC），蛋白质酶解之后利用免疫沉淀方法富集乙酰化肽段，再结合色谱分离技术和质谱技术（HPLC/MS），实现对乙酰化修饰的定性和定量研究。•

特点：灵敏度分辨率高，可与多种技术结合使用；但耗时长，操作复杂，很难大规模应用

蛋白芯片技术：将捕获抗体固定于基质材料，通过靶蛋白和捕获抗体的相互作用捕获靶蛋白，之后利用预先标记的检测抗体或者标志物识别靶分子并进行定量分析。•

特点：高通量，特异性和敏度都较高，且样品消耗量非常小；但成本相对较高，技术体系不完整，缺乏统一性