Edman法：揭示蛋白质N-末端氨基酸序列的经典生物化学方法......

Edman degradation，又称为Edman sequencing，是一种用于测定蛋白质N-末端氨基酸序列的生物化学方法。这一方法由美国生物化学家Pehr Edman于1950年首次提出，并在随后的几十年中不断改进和应用。Edman法通常用于分析较小的蛋白质或肽段的氨基酸序列，它的主要步骤包括：

图1.Edman测序反应过程

1.样品制备：

首先，需要纯化目标蛋白质或肽段。通常，蛋白质会被还原为其游离氨基酸，然后与一种特殊的标记试剂，如Edman试剂（常用的是硫氰酸苯酯，phenyl isothiocyanate）反应形成氨基酸-N-末端的标记化合物。

2.Edman降解：

将标记化合物暴露于酸性条件下，从而导致N-末端氨基酸与Edman试剂发生氨基酸酮衍生物的反应。在此反应中，Edman试剂与目标氨基酸的N-末端氨基基团发生取代反应，形成一个稳定的衍生物。此过程通常进行10到20个氨基酸循环，每个循环测定一个氨基酸。

3.取代反应：

发生反应的标记化合物会被收集，并通过酸碱中和将其从反应容器中移除。

4.分析和检测：

分析和检测收集到的标记化合物，通常使用高效液相色谱（HPLC）等技术来分离和鉴定氨基酸或氨基酸酮衍生物。然后，可以确定每个循环中N-末端的氨基酸。

Edman降解的主要限制在于其适用于较小的蛋白质和肽段，通常在30到50个氨基酸之间。对于较大的蛋白质，可能需要其他序列测定方法，如质谱法（mass spectrometry）。然而，Edman法仍然是研究小型蛋白质和肽段N-末端序列的有用工具，特别是在蛋白质结构和功能研究中。