生物制品表征常见问题与解答（九）

Q1.在用HPLC做单糖组成时发现紧挨着岩藻糖后面还有一个峰，请问可能是什么糖?

A:

在HPLC分析单糖组成时，如果在岩藻糖（Fucose）峰后紧挨着出现了一个未知峰，这个峰可能是其他单糖或者一些衍生物。常见的单糖包括：

• 半乳糖（Galactose）：它在许多分析条件下可能与岩藻糖接近，但通常出现在不同的保留时间。
• 甘露糖（Mannose）：有时也可能出现在岩藻糖附近。
• 葡萄糖（Glucose）：虽然通常出现在不同的保留时间，但在某些条件下可能会接近岩藻糖。
   

为了准确确定这个未知峰，可以考虑以下方法：

• 标准品对照：使用已知单糖的标准品，进行保留时间对比。
• 质谱分析：通过质谱（MS）分析该峰，确定其分子量和结构信息。
• 改变色谱条件：尝试改变流动相或柱子等色谱条件，以分离出该未知峰。
   

具体的糖类识别需要结合已知样品的具体情况和分析条件来判断。如果可能，建议进行上述方法的组合使用，以提高识别的准确性。

Q2.请问同属不同种的植物可以作为参考基因组吗？

A:

同属不同种的植物可以作为参考基因组，当缺乏目标物种的参考基因组时，通常会选择与目标物种近亲关系的物种的基因组作为参考。这是因为它们具有相似的遗传背景和进化历史，其基因组结构可能与目标物种相似。但是，这种方法的精确性会受到物种间遗传差异的影响。因此，理想情况下，应使用目标物种的参考基因组。

Q3.请问高效液相仪器如何操作？怎么做高效液相测定含量，怎么计算药物装载率？

A:

一、操作高效液相色谱仪（HPLC）的步骤如下

1、开机与准备

（1）电源启动：打开HPLC系统的电源，包括泵、检测器、自动进样器（如有）和电脑软件。

（2）流动相准备：配制所需的流动相，并进行脱气处理（使用超声波仪或通过系统自带的在线脱气装置），确保流动相干净无气泡。

（3）色谱柱安装：选择适合的色谱柱（如C18反相色谱柱）并安装在色谱系统中，确保连接稳固无气泡。

（4）冲洗管路：打开泵，以低流速（如0.1 mL/min）让流动相流过系统，冲洗管路和色谱柱，排除空气。

2、系统参数设置

（1）流速设置：根据实验要求设置流动相的流速，通常为0.5-1 mL/min。

（2）柱温设定：如需恒温控制，设定柱温（一般为25-40°C），根据实验需求调整。

（3）检测器设置：选择检测器（如UV-Vis）并设置适合目标化合物的波长（如254 nm、280 nm等），对于质谱检测器（MS），设置离子源参数等。

3、系统平衡

（1）系统预冲：在正式进样前，使用流动相冲洗系统和色谱柱，通常需要平衡20-30分钟，直到基线稳定。

（2）检查基线：通过软件监测检测器的基线稳定性，确保无噪音和波动过大。

4、样品进样

（1）样品制备：将样品溶解于流动相兼容的溶剂中，并使用滤膜（0.22 μm或0.45 μm）过滤样品，避免颗粒堵塞色谱柱。

（2）进样：手动进样或使用自动进样器进行样品注射，设定进样体积（通常为10-20 μL）。

（3）样品分析：启动样品分析，HPLC系统根据预设程序分离样品中的组分。

5、数据采集

（1）监控色谱图：通过软件实时观察色谱图，记录目标化合物的保留时间、峰面积等数据。

（2）数据保存：完成分析后，保存色谱数据，供后续定量或定性分析使用。

6、实验结束与清洗

（1）系统清洗：分析完成后，用高比例有机溶剂（如yǐ jīng或甲醇）冲洗系统和色谱柱，以防流动相残留导致柱子堵塞或性能下降。

（2）色谱柱保存：如果长时间不使用，按照说明将色谱柱用合适的保存液（通常是甲醇）冲洗保存。

7、关机

（1）停止泵运行：关闭泵，停止流动相的输送。

（2）关闭系统：关闭HPLC仪器和检测器，最后关闭软件和电脑。

二、高效液相测定含量的过程一般如下

1、根据已知浓度的标准品制作出不同浓度的溶液，然后进行高效液相色谱分析，得到各浓度下的峰面积，并绘制标准曲线。

2、用同样的方法测定样品的峰面积，然后根据标准曲线，确定样品中待测物质的浓度。

三、药物装载率的计算

1、药物装载率定义：药物装载率是指载体（如纳米颗粒、脂质体）中药物的质量占药物-载体复合物总质量的百分比。

2、测定药物质量：使用HPLC测定复合物中的药物浓度。

3、载体和药物总质量：通常是复合物制备时已知的载体质量和药物的总质量。

4、药物装载率的计算公式：药物装载率(%) = (实际装载药物质量 / 载药体质量)×100%

例如，如果载药体质量为100mg，实际装载药物质量为10mg，那么药物装载率为10%。

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