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蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

298 人阅读发布时间:2021-04-27 17:09

蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定

百泰派克生物结合MALDI-TOF质谱系统与LC-MS/MS质谱系统,提供专业准确的蛋白胶点、胶条、IP样品,CO-IP样品蛋白鉴定服务。可鉴定的样品包括:1D-SDS PAGE分离的蛋白胶条,2DE PAGE中的蛋白胶点,蛋白表达产物,免疫共沉淀(Co-IP)样品。其中,蛋白质样品的鉴定前处理过程严格按照Nature Methods发表的文章:Universal sample preparation method for proteome analysis进行,保证鉴定试验中得到更高的肽段覆盖率。质谱鉴定的原理则是基于鸟枪法(Shot-gun):将蛋白条带或者蛋白溶液酶切成肽段混合物,经高效液相色谱分离得到若干较为简单的组分,进入高分辨率质谱仪中进行分析。检索软件根据二级质谱信息与相应的数据库比对,结合匹配度打分及错配过滤,可得到肽段的确切序列,进而拼接出各蛋白的完整序列,从而实现对蛋白的鉴定。

蛋白质质谱鉴定流程


基于鸟枪法(shot-gunLC-MS的蛋白鉴定流程

关于样品

1D SDS PAGE /2D PAGE gels样品:
1. Coomassie Blue, SYPRO Ruby 以及Silver stain样品均可进行蛋白的鉴定试验;
2. 银染的样品有可能与后续的质谱分析不兼容,我们推荐您使用下面的产品或者实验步骤进行银染实验:
ProteoSilver Plus, Sigma (Product # PROTSIL1 or PROTSIL2)
Dodeca Silver Stain, BioRad (Product # 161-0481 or 161-0480)
3.
银染的样品请不要进行脱色处理

液体样品(In solution format):
1. 假如样品中蛋白量>10ug,我们对样品的缓冲体系没有要求;
2. 假如样品中蛋白量<10ug,样品准备过程中尽量减少SDS等表面活性剂的使用,并注意降低盐浓度;
3. 提交样品过程中,注意提供样品的缓冲体系和样品中蛋白的预估含量;

Co-IP样品:
1. 如果您洗脱的样品需要跑胶,请按照1D SDS PAGE样品准备要求准备样品即可;
2. 如果您直接提交洗脱样品,我们推荐使用HPH EB (0.5 M NH4OH, 0.5 mM EDTA) 缓冲体系进行蛋白洗脱,保证洗脱缓冲体系与后续的质谱实验兼容;

样品运输:
1. 我们推荐您将样品冻干后进行运输,冻干样品中蛋白非常稳定。
2. 液体样品推荐干冰运输,短途运输冰袋也可以。

注意事项: 利用质谱进行蛋白样品的鉴定,在样品准备过程中需佩戴手套和头套,尽量避免自身角蛋白(keratin)对样品的污染。

研究案例

该项目是中国科学院生物物理所一位老师将她的Co-IP的样品寄给我们进行蛋白鉴定。得到的部分结果如下图所示:

蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白鉴定研究案例

从图中客户看出,我们提供的结果报告中包含鉴定到的蛋白的Accession Number, Peptide coverage, 鉴定出的肽段信息,鉴定出的肽段的修饰信息以及对鉴定到的蛋白的详细描述。

/英文项目报告:

在技术报告中,百泰派克会为您提供详细的中英文双语版技术报告,报告包括:

1. 实验步骤(中英文)
2. 相关的质谱参数(中英文)
3. 质谱图片
4. 原始数据
5. 鉴定的蛋白质详细信息

蛋白胶点、胶条、IP样品质谱鉴定一站式服务

您只需下单-寄送样品
百泰派克一站式服务完成:样品处理-上机分析-数据分析-项目报告





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地址:北京市经济技术开发区科创六街88号院

 

关于百泰派克

北京百泰派克生物科技有限公司(Beijing Bio-Tech Pack Technology Company Ltd. 简称BTP)成立于2015年,是国家级高新技术企业,业务范围主要围绕蛋白和小分子代谢物检测两大板块,从事蛋白质和小分子代谢物的理化性质分析及结构解析等相关技术服务,为客户提供高性价比、高效率的技术服务。深耕蛋白鉴定、定量蛋白组(iTRAQ/TMT、label free、DIA/SWATCH)、PRM靶蛋白定量、蛋白和抗体测序、蛋白修饰(二硫键、糖基化、磷酸化、乙酰化、泛素化等)、靶向和非靶向代谢物检测。

百泰派克生物科技检测平台包括:检测分析平台、蛋白质组学分析平台、代谢组学分析平台、蛋白质从头测序平台、生物制药分析平台和流式细胞多因子检测平台。公司拥有独立的质谱实验室、色谱实验室、细胞培养室和免疫学实验室,以及高分辨率质谱仪和高效液相色谱。目前已与国内外多家药物研发企业,以及哈佛大学、北京大学在内的国内外高校建立了合作关系,协助客户发表了多篇中英文文章,包括Cell等多家高水平期刊。

公司自主检测平台发展至今,已覆盖蛋白质组学、代谢组学、生物制药、生信分析等多组学检测平台,积累了丰富的实践经验,凭借专业的技术和优质的服务水平,客户覆盖北京大学、清华大学、中科院等多所知名院校,也与国内外多家药物研发企业建立合作关系。公司始终致力于为各科研院校、企业和机构提供高效、准确、高性价比的蛋白质(组)研究技术包裹,助力客户在基础研究、分子诊断及其他生命科学研究领域取得突破,为生命科学的发展做出贡献。

 

百泰派克技术平台

检测分析平台:多台高分辨率质谱仪、高效液相色谱、气相色谱,NMR。
蛋白质组分析平台:Label-free、iTRAQ、SILAC、SWATH、MRM;蛋白质定性定量鉴定、蛋白质差异分析、发现疾病标记物、发现药物靶标。
代谢组分析平台:靶向代谢组学、非靶向代谢组学、脂质组学分析;通量达1000种代谢分子、代谢通路分析、代谢靶标鉴定。流式细胞多因子检测平台:CBA、FlowCytomix;微量样品需求,分析多种细胞因子。
蛋白质从头测序平台:Obitrap Fusion Lumos质谱仪、PEAKS软件分析;100%序列测定,精准蛋白、抗体测序。
生物制药分析平台:生物药物鉴定、变异性分析、纯度分析。
流式细胞多因子检测平台:CBA、FlowCytomix;微量样品需求,分析多种细胞因子。

 
资料格式:

蛋白胶点、胶条、IP样品蛋白质鉴定.pdf

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