泛素化蛋白检测

泛素化蛋白检测是为了鉴定和量化蛋白质在经过泛素化翻译后修饰后的状态。以下是检测泛素化蛋白的常用方法：

图1.泛素化修饰研究路线

1、免疫印迹分析 (Western Blot)：

免疫印迹是检测泛素化蛋白的常用方法。这个过程通常包括：

• 提取蛋白质样本。
• 使用SDS-PAGE电泳分离蛋白质。
• 将蛋白质转移到膜上。
• 使用针对泛素的抗体进行检测，以识别泛素化的蛋白质。

2、免疫沉淀 (Immunoprecipitation, IP)：

• 目的: 富集特定的泛素化目标蛋白。
• 方法: 使用目标蛋白的特异性抗体进行免疫沉淀，然后进行Western blot，使用抗泛素抗体来检测泛素化。

3、双免疫沉淀 (Tandem Immunoprecipitation)：

• 目的: 鉴定与目标蛋白相关的特定泛素链类型。
• 方法: 首先使用抗泛素链特异性抗体（例如抗-K48或抗-K63链的抗体）进行沉淀，然后使用目标蛋白的抗体进行第二次沉淀。

4、质谱分析 (Mass Spectrometry)：

• 目的: 鉴定泛素化位点以及泛素链的类型。
• 方法: 利用LC-MS/MS技术鉴定泛素化的蛋白质和修饰位点。经常结合酶消化（如Trypsin消化）来产生肽段，然后进行分析。

5、荧光显微镜技术

• 使用标记泛素的荧光标签，观察泛素化蛋白在细胞中的位置和分布。这种方法可以用于实时监测泛素化事件。