蛋白质测序 Q&A
Q1: 蛋白质测序需要保持蛋白活性吗?
A1: 不需要。蛋白质测序关注的是氨基酸序列信息,而非蛋白的生物学功能。因此,无论采用Edman降解法还是质谱法,测序过程中蛋白是否具有活性都不会影响序列结果。实际上,大多数测序流程(如还原、烷基化、酶切或电离)本身就会破坏蛋白活性结构。因此,样品只需结构完整、无严重降解或污染即可,无需保持功能活性。Q2: 在蛋白测序中如何选择 Edman 降解法或质谱法?
A2: 可根据样品性质与测序目的综合判断:
● 当样品为高纯度(>90%)的单一蛋白,且目标是明确N端序列(如验证信号肽切除、N端起始点),优先考虑Edman降解。Edman法适合读出前10–30个氨基酸,但不适用于N端被修饰或阻断的蛋白。
● 当样品纯度较低、含多种蛋白或目标未知时,选择质谱法,尤其适用于复杂混合物、蛋白指纹图谱、全序列解析、翻译后修饰检测。质谱不依赖N端、覆盖范围更广,可结合数据库进行高通量分析。
135 人阅读发布时间:2025-06-24 13:43